Objetivou-se avaliar os efeitos da suplementação com diferentes fontes de energia e de compostos nitrogenados sobre o crescimento e produção de bacteriocinas de bactérias ácido-láticas in vitro. As incubações foram conduzidas utilizando-se fluido ruminal originado de um novilho Holandês-Zebu fistulado no rúmen. O animal foi mantido em pastagem de Brachiaria decumbens recebendo 200 g/dia de proteína bruta suplementar. Os substratos e o inóculo foram acondicionados em frascos de vidro considerando-se oito tratamentos: celulose, celulose e caseína, celulose e peptona de soja, celulose e ureia, amido, amido e caseína, amido e peptona de soja e amido e ureia. Incubações sucessivas foram conduzidas para seleção dos microrganismos em função das fontes energéticas e de compostos nitrogenados. O amido favoreceu o crescimento de bactérias ácido-láticas em comparação à celulose. A suplementação com proteína verdadeira (peptona de soja e caseína) estimulou o crescimento dessas bactérias em comparação ao controle (sem suplementação com compostos nitrogenados). A adição de ureia não estimulou o crescimento de bactérias ácido-láticas. Nenhuma atividade antimicrobiana foi detectada a partir das colônias de bactérias ácido-láticas isoladas. Fontes de proteína verdadeira incrementam a competição entre bactérias fermentadoras de carboidratos estruturais e não-estruturais. ; The objective of this study was to evaluate the effects of supplementation with different sources of energy and nitrogenous compounds on the in vitro growth and production of bacteriocin of lactic acid bacteria. Incubations were performed by using ruminal fluid from a rumen-fistulated Holstein-Zebu steer. The animal was kept on a Brachiaria decumbens pasture receiving 200 g/day of supplemental crude protein. Substrates and inoculum were placed in glass flasks considering eight treatments: cellulose, cellulose and casein, cellulose and soy peptone, cellulose and urea, starch, starch and casein, starch and soy peptone and starch and urea. Successive incubations were conducted to select microorganisms according to the energy sources and nitrogenous compounds. Starch favoured growth of lactic acid bacteria when compared to cellulose. Supplementation with true protein (soy peptone and casein) stimulated the growth of these bacteria when compared to the control (without supplementation with nitrogenous compounds). The addition of urea did not stimulate the growth of lactic acid bacteria. No antimicrobial activity was detected from colonies of isolated lactic acid bacteria. Sources of true protein increase the competition between non-structural and structural carbohydrates fermenting bacteria.