The increasing demand for triacylglycerols (TAGs) together with the unsustainability of its traditional obtainment has motivated strong research efforts towards alternative processes for its generation. In this work we study the metabolic pathways leading to TAG accumulation in microorganisms and focus on two important applications of these neutral lipids: biodiesel production and supplements for human health. With the general purpose of widening our knowledge on the reaction catalysed by the enzymes WS/DGAT, reported to be responsible for the last step in the TAG biosynthetic pathway, this work address the process carried out in genetically engineered Escherichia coli bacteria expressing proteins from this family (especially tDGAT, from Thermomonospora curvata-), estimating the TAG production yield and analysing the fatty acid composition of the lipids produced by the recombinant strain. Moreover, we created a E.coli strain able to simultaneously generate ω-3 polyunsaturated fatty acids and TAGs, paving the way for developing a novel process for the production of these treasured molecules. ; RESUMEN:La creciente demanda de triglicéridos (TAGs) junto con las limitaciones de su actual modelo de obtención ha motivado importantes esfuerzos de investigación hacia alternativas sostenibles para su producción. En este trabajo estudiamos las rutas metabólicas implicadas en la acumulación de TAG en microorganismos, centrándonos en dos importantes aplicaciones de estos lípidos neutros: la producción de biodiesel y suplementos específicos para la salud humana. Con el propósito de profundizar en la reacción catalizada por las enzimas WS/DGAT, responsables del último paso en la biosíntesis de TAG, este trabajo aborda el proceso realizado en la bacteria Escherichia coli genéticamente modificada para expresar proteínas de esta familia (sobretodo tDGAT, de Thermomonospora curvata), calculando el rendimiento de producción y analizando la composición en ácidos grasos de los lípidos producidos. Además, creamos una cepa de E.coli capaz de producir simultáneamente ácidos grasos poliinsaturados ω-3 y TAG, sentando las bases para el desarrollo de nuevos y eficientes procesos de producción de estas valiosas moléculas. ; El presente trabajo ha sido realizado entre el Departamento de Biología Molecular de la Universidad de Cantabria y el Departamento de Microbiología y Genómica del Instituto de Biomedicina y Biotecnología de Cantabria, bajo la dirección del Dr. Gabriel Moncalián Montes, gracias a un contrato de la Universidad de Cantabria asociado a los proyectos “Aceites a la carta: bioingeniería de la síntesis de monoésteres y triglicéridos en microorganismos” (BIO2010-14809, del Ministerio de Ciencia e Innovación) y “Producción de aceites de interés comercial en microorganismos modificados genéticamente” (2014). Durante este periodo se ha realizado una estancia de diez meses en el laboratorio de la Dra. Cintia D. F. Milagre (Instituto de Química, Universidad Estatal Paulista "Júlio de Mesquita Filho"– UNESP –, Araraquara, Brasil), gracias a una ayuda de la Comisión Europea (Programa Erasmus Mundus, Proyecto iBrasil, 2014/2015).