RESUMO Os metabólitos secundários extraídos de essências florestais conhecidamente micossimbiontes podem estimular o crescimento de isolados ectomicorrízicos in vitro. Assim, determinou-se o efeito de concentrações do óleo essencial de Eucalyptus grandis no estímulo ao crescimento dos fungos ectomicorrízicosPisolithus sp. (UFSC Pt 24 e UFSC Pt 188), Pisolithus microcarpus (UFSC Pt 116), Chondrogaster angustiporus (UFSC Ch 163), Scleroderma citrinum (UFSC Sc 124) e Suillus sp. (UFSM RA 2.2 e UFSM RA 2.8) em meio de cultura líquido. Após o período de 25 dias de incubação, avaliou-se a morfologia e o crescimento dos isolados. A adição do óleo essencial nas concentrações de 20 a 30 μL L-1 promoveu crescimento miceliano in vitro nos isolados UFSC Pt 24, UFSC Pt 116, UFSC Ch 163, UFSC Sc 124, UFSM RA 2.2 e UFSM RA 2.8. A adição do óleo essencial na concentração de 20 μL L-1 resultou em aumento no diâmetro e na ramificação das hifas dos isolados UFSC Pt 116 e UFSC Pt 24. A utilização de óleo essencial na elaboração de meios de cultura para o crescimento de isolados ectomicorrízicos mostra-se eficiente, por aumentar a produção de massa micelial do fungo.