Os laboratórios de fitoterápicos necessitam de metodologias que assegurem o controle de qualidade de seus produtos quando os mesmos não constam em farmacopéias ou monografias oficiais. Baseando-se neste fato, o presente estudo visou validar uma metodologia analítica para quantificação de flavonóides contidos nos extratos da pata-de-vaca (Bauhinia cheilantha [Bongard] Steudel), através de espectrofotometria no visível, como equivalentes de Rutina (µg/mL). Todos os parâmetros exigidos pela ANVISA foram avaliados. No teste de especificidade, observou-se a existência de pico máximo a 420 nm. O método foi considerado linear e com alta sensibilidade de quantificação (2,51 µg/mL). O método também mostrou-se robusto e com elevada recuperação (98,36%). Os resultados obtidos para repetibilidade (intra-corrida), precisão intermediária (inter-corridas) e reprodutibilidade certificaram a precisão do método com valores entre 0,31 e 3,58%, sendo também considerado exato (95,71-105,50%). Com este estudo, o método proposto foi considerado específico, preciso, reprodutível, exato, de baixo custo e fácil execução.