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Obtención y caracterización bioquímica e inmunológica de la proteína recombinante Opc de Neisseria meningitidis. Demostración de su capacidad como proteína portadora para inmunización con ADN.

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Abstract

La proteína Opc es uno de los antígenos mayoritarios de la membrana externa de Neisseria meningitidis. Esta proteína se encuentra presente en los preparados vacunales existentes contra esta bacteria y los anticuerpos específicos generados después de la inmunización con los mismos han mostrado actividad bactericida y opsónica contra N. meningitidis. Opc facilita la adhesión e invasión del meningococo a células epiteliales y endoteliales.El gen opc se clonó y expresó en la bacteria Escherichia coli y en la levadura Pichia pastoris y la proteína recombinante obtenida se purificó y se caracterizó bioquímica e inmunológicamente. Opc obtenida en ambos sistemas hospederos resultó ser antigénica e inmunogénica en ratones. Los anticuerpos murinos generados contra este antígeno reconocieron la proteína natural presente en el meningococo y tuvieron actividad funcional (bactericida y opsónica). Adicionalmente, se evaluó la capacidad de Opc de acomplejar ADN plasmídico para potenciar la respuesta inmune en inmunización con ADN. Se obtuvieron complejos ADN-proteína, los cuales fueron caracterizados bioquímicamente. Se demostró expresión transciente del gen reportero (b-galactosidasa) en células COS-7. Después de la inmunización de ratones por vía intranasal, estos complejos generaron una respuesta humoral y celular contra la proteína expresada por dicho gen. En otro estudio se prepararon complejos de Opc-ADN (plásmidos codificantes para hemaglutinina y la nucleoproteína del virus de influenza). Estos fueron utilizados para la inmunización primaria de ratones por vía intranasal. Seguidamente los ratones recibieron una dosis de refuerzo con virus inactivado. En los ratones sensibilizados con los complejos Opc-ADN se apreció una potente respuesta celular contra los antígenos del virus de influenza.