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Elsevier, Biochimie, 9(91), p. 1112-1122

DOI: 10.1016/j.biochi.2009.05.010

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Redesigning the reactive site loop of the wheat subtilisin/chymotrypsin inhibitor (WSCI) by site-directed mutagenesis. A protein–protein interaction study by affinity chromatography and molecular modeling

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Abstract

A site-directed mutagenesis strategy was employed to obtain four mutants of wheat subtilisin/chymotrypsin inhibitor (WSCI), with the aim to produce inactive forms of this protein. The mutants were expressed in Escherichia coli as fusion proteins and, after the tag removal, were purified to homogeneity and characterized, for their interaction with the inhibited enzymes, by affinity chromatography and molecular modeling. ; Al fine di ottenere forme inattive di un inibitore proteico della subtilisina e della chimotripsina, è stata impiegata una strategia di mutagenesi sito-specifica. Sono stati così ottenuti quattro prodotti di espressione eterologa (mutanti dell’inibitore WSCI) che dopo purificazione sono stati sottoposti ad ampia caratterizzazione. In particolare, loro interazione con alcuni enzimi proteolitici d’interesse è stata studiata mediante cromatografia di affinità e modellamento molecolare. ; L'articolo é disponibile sul sito dell'editore: http://www.sciencedirect.com ; 1. Grant COFIN 2006 by Ministero Italiano Istruzione Università e Ricerca (MIUR) and Università degli Studi della Tuscia. 2. Seconda Università degli Studi di Napoli. 3. Post-doc felloship by Università degli Studi della Tuscia