A cultura da erva-mate está exposta a doenças que prejudicam o desenvolvimento da planta, reduzindo a produtividade. Dentre essas doenças têm-se a podridão-de-raízes causada por Fusarium spp. O objetivo deste trabalho foi avaliar a ação antagonista in vitro de Trichoderma spp. sobre Fusarium oxysporum, agente causal da podridão-de-raízes em erva-mate. Foram utilizados quatro isolados de Trichoderma spp. e um isolado de Fusarium oxysporum. A ação antagônica de Trichoderma spp. sobre F. oxysporum foi avaliada por meio do teste de pareamento de culturas e de metabólitos voláteis. No teste de pareamento de culturas, os isolados de Trichoderma spp. inibiram o crescimento micelial de Fusarium oxysporum, com percentual de inibição que variou de 13,06% a 14,24%. No teste de metabólitos voláteis, T. tomentosum e T. harzianum apresentaram os melhores resultados de inibição, com 27,70% e 24,46%, respectivamente. Assim, pode-se concluir que Trichoderma spp. apresenta ação antagonista in vitro contra F. oxysporum, agente causal da podridão-de-raízes em erva-mate.