A 4-hidroxicumarina (4H) é um composto fenólico natural e sintético que apresenta atributos importantes, incluindo propriedades anti-HIV, antitumoral e anticoagulante. Considerando suas importantes atividades biológicas e a utilização da 4H, o objetivo do presente estudo foi investigar as atividades tóxica, mutagênica, antimutagênica e antioxidante da 4H, obtido comercialmente, em experimentos in vivo e in vitro. Os efeitos da administração oral aguda na dose de 200 mg / kg de 4H foram investigados pela triagem hipocrática em animais. O ensaio de micronúcleo em sangue periférico e o teste de Ames foram utilizados para análise de mutagenicidade, enquanto a antimutagenicidade foi testada contra a ciclofosfamida também pelo ensaio de micronúcleo in vivo. Para todos os testes in vivo foram utilizados camundongos Swiss. A atividade antioxidante foi determinada pela capacidade da amostra 4H de sequestrar o radical estável 2,2-difenil-1-picrilhidrazil (DPPH). Os resultados mostraram que o 4H não induziu alterações no comportamento ou na histologia dos animais tratados nem na atividade mutagênica (gênica ou cromossômica). Por outro lado, exibiu efeito protetor contra ciclofosfamida e potencial antioxidante. A 4H é amplamente utilizada clinicamente como uma molécula precursora na síntese de fármacos anticoagulantes sintéticos. Portanto, os resultados obtidos são de extrema importância, pois demonstram ausência de potencial mutagênico e proteção contra danos cromossômicos.