Objetivo: verificar o conhecimento de enfermeiros sobre eletrofisiologia e noções de interpretação do eletrocardiograma. Método: estudo observacional, transversal, analítico, quantitativo, realizado em um hospital do centro-oeste brasileiro. Amostra não probabilística foi constituída por enfermeiros atuantes no referido hospital. Para a coleta de dados foi elaborado e validado o questionário de averiguação do conhecimento. Foram realizadas análises de frequência simples e de tendência central e dispersão, adotando-se o teste qui-quadrado, com nível de significância de 5%. Resultados: participaram do estudo 20 enfermeiros, a maioria do sexo feminino, com média de idade de 34,6 anos. Foi possível identificar déficit no conhecimento dos enfermeiros sobre eletrofisiologia e noções de eletrocardiograma, entretanto, aqueles profissionais que realizaram cursos de atualização sobre a temática obtiveram níveis mais elevados de conhecimentos sobre o assunto. Conclusão: verificaram-se fragilidades dos enfermeiros no que se refere ao conhecimento sobre eletrofisiologia, identificação de traçados eletrocardiográficos fisiológicos e patológicos.