As espécies do gênero Lippia (Verbenaceae) são amplamente usadas na medicina tradicional no tratamento de desordens respiratórias e gastrointestinais. Neste estudo, avaliou-se o efeito relaxante do óleo essencial obtido de Lippia microphylla Cham. (LM‑EO) e seus componentes majoritários em íleo isolado de cobaias bem como elucidou‑se os mecanismos envolvidos. LM-EO inibiu as contrações fásicas e relaxou as tônicas induzidas por vários agentes contráteis em íleo de cobaia. Resultados semelhantes foram observados nos protocolos utilizando-se timol e carvacrol, os componentes majoritários de LM-EO. O bloqueio dos canais de cálcio dependentes de voltagem (CaV) foi sugerido uma vez que LM-EO deslocou para a direita e de maneira não paralela as contrações cumulativas induzidas por CaCl2 e confirmou-se quando LM-EO relaxou o íleo pré-contraído por S‑(‑)‑Bay K8644, um agonista seletivo dos CaV. Na camada muscular circular do íleo, LM-EO inibiu as contrações fásicas, sendo equipotente em relação aos efeitos no íleo íntegro. No miócitos isolados da camada longitudinal do íleo, LM-EO reduziu a intensidade da fluorescência induzida por histamina, semelhantemente ao verapamil (bloqueador CaV), indicando uma redução na concentração citosólica de cálcio ([Ca2+]c). Dessa forma, LM-EO apresenta uma atividade espasmolítica em íleo de cobaia pelo bloqueio dos CaV e consequente redução da [Ca2+]c. Esses resultados demostram-se como uma justificativa para o uso de L. microphylla como um produto terapêutico nas desordens intestinais.