O presente estudo teve como objetivo extrair e avaliar o potencial antimicrobiano e citotóxico de frações ricas em alcaloides obtidas a partir das partes aéreas de Mitracarpus frigidus. O isolamento de alcaloides foi realizado por meio de extração ácido-base e cromatografia em coluna com Sephadex LH-20 como fase estacionária. A atividade antimicrobiana foi avaliada pelo método de microdiluição em caldo para determinação da concentração inibitório mínima (CIM) e também por parâmetros quantitativos antimicrobianos (atividade total, percentual de atividade e índice de susceptibilidade microbiano) contra nove linhagens de microrganismos: Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium, Shigella sonnei, Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli, Bacillus cereus, Candida albicans e Cryptococcus neoformans. A citotoxicidade foi testada frente a Artemia salina e duas linhagens de células leucêmicas, HL60 e Jurkart. A fração mais rica em alcaloides apresentou atividade expressiva para S. aureus, S. typhimurium, B. cereus, P. aeruginosa, S. sonnei e C. neoforman com CIM abaixo de 0,100 mg/mL. As amostras não apresentaram efeito citotóxico frente a A. salina e em relação as linhagens de células tumorais, somente as frações mais ricas em alcaloides apresentaram uma moderada atividade com cerca 50 e 35% de diminuição da viabilidade celular para HL60 e Jurkart, respectivamente. Os resultados apresentados abrem perspectivas para o futuro isolamento, purificação e identificação de substâncias bioativas de M. frigidus que possam ser utilizadas, principalmente no tratamento de infecções microbianas.