Pleurotus spp. são fungos capazes de degradar a lignocelulose graças à excreção de enzimas com diferentes aplicações industriais. O objetivo deste estudo foi avaliar a influência dos meios de cultivo na produção de biomassa micelial e na atividade de lacase, celulases e xilanase de Pleurotus spp. Pleurotus citrinopileatus U16-23, P. djamor U16-20, U16-25 e U16-28, P. eryngii U16-30, P. ostreatus U16-22 e P. pulmonarius U16-21 foram cultivados por 12 dias a 28 ºC em meio extrato de malte (EM-20 g L-1), meio definido (MD glicose 10 g L-1 e extrato de levedura 2 g L-1), ou em meio bagaço de cana-de-açúcar (BC) igual ao MD, mas substituindo glicose por bagaço (50 g L-1). O maior crescimento ocorreu no meio EM e P. djamor U16-25 a cepa que gerou mais biomassa (7,5 ± 0,1 g L-1). A maioria das cepas apresentou maior atividade de lacase no meio MD e as atividades maiores foram de P. djamor U16-25 (22243 ± 745 U L-1) e P. pulmonarius (20924 ± 46 U L-1). P. citrinopileatus e P. djamor U16-25 não produziram celulases, mas P. djamor U16-20 e P. eryngii produziram as maiores atividades de celulase nos meios EM e MD. Todas as cepas produziram xilanase em e as maiores atividades foram observadas no meio EM e P. djamor U16-28 (67154 ± 1597 U L-1) foi o maior produtor. Pleurotus djamor U16-25 se destacou como produtor de lacase e de xilanase livre de celulase revelando potencial para aplicação na indústria de papel e celulose.