Objetivo: Comparar o uso de substâncias psicoativas em profissionais da enfermagem da atenção básica e de instituição hospitalar. Método: Estudo transversal, desenvolvido com profissionais de enfermagem, utilizando-se dois instrumentos: caracterização sociodemográfica e ocupacional e o Alcohol, Smoking and Substance Involvement Screening Test. Na análise dos dados, utilizou-se estatística descritiva e o teste qui-quadrado para verificar as associações. Resultados: O consumo de álcool e tabaco na vida e, nos três últimos meses, foi, proporcionalmente, maior entre profissionais da atenção básica. O uso de sedativos foi maior nas instituições hospitalares, sobretudo o uso na vida (p=0,05). O forte desejo de álcool e sedativos esteve presente entre profissionais das instituições hospitalares e para o tabaco foi maior nos profissionais da atenção básica. Conclusão: Ao comparar, nota-se que houve uso distinto de drogas entre os profissionais das instituições hospitalares e os profissionais da atenção básica.