RESUMO Objetivo Avaliar conhecimento e comportamento dos profissionais de Unidades de Terapia Intensiva quanto às ações recomendadas no bundle de prevenção de infecção de corrente sanguínea relacionada ao cateter venoso central. Método Estudo transversal, descritivo, com abordagem quantitativa, realizado em três Unidades de Terapia Intensiva. Os dados foram coletados por meio de questionário aplicado face-a-face com profissionais de saúde. Utilizou-se o software R 3.3.1 para análise dos dados. Resultados Participaram 292 profissionais. Quanto ao conhecimento, o item higienização das mãos apresentou maior nível tanto no momento da inserção (92,46%) como na manutenção (97,27%). O uso do degermante clorexidina, seguido por alcoólico (47,94%) e datar hub ou conectores (19,87%) foram os itens de menor conhecimento. Quanto ao comportamento, os profissionais relataram: sempre usar a paramentação correta para inserção do cateter (84,25%), nunca esperar a secagem do antisséptico antes de inserir o cateter (25,34%) e nunca realizar limpeza do hub ou conectores com álcool 70% (23,86%). Conclusão Os resultados demonstram que o conhecimento e comportamento dos profissionais em relação ao bundle de cateter venoso central apresentam fragilidades, revelando a importância de incentivar programas de capacitação nesta área do conhecimento.