A Reserva Biológica de Duas Bocas (2.190 ha) é um dos maiores remanescentes de Mata Atlântica do Estado do Espírito Santo, Sudeste do Brasil. Nós amostramos tetrápodes não voadores nessa área entre maio de 2007 e abril de 2008, utilizando armadilhas de queda, armadilhas de isca, armadilhas fotográficas e buscas oportunísticas diurnas e noturnas. Além disso, nós compilamos registros de vertebrados não voadores ocorrentes nesta área disponíveis na literatura e através de espécimes em museus. Nós documentamos 52 espécies de anfíbios, 24 espécies de répteis não voadores e 39 espécies de mamíferos não voadores. Do total de 115 espécies, 47 configuram novos registros para a área e seis outras espécies tiveram sua distribuição geográfica ampliada com os resultados do presente estudo. Além disso, apresentamos o registro de predação da perereca Hypsiboas faber pela serpente Chironius bicarinatus. Cinco das espécies registradas são listadas como ameaçadas no Estado do Espírito Santo e muitas outras possuem estado de conservação incerto. A Reserva Biológica de Duas Bocas é um importante refúgio de vida selvagem, principalmente quando consideramos a expansão de áreas urbanas no seu entorno. ; ABSTRACT Reserva Biológica de Duas Bocas (2,910 ha) is one of the largest Atlantic forest remnants in the State of Espírito Santo, Southeastern Brazil. We recorded non-volant tetrapods in this area from May 2007 through April 2008, using pitfalls, live traps, camera traps, and diurnal and nocturnal opportunistic searches. In addition, we compiled available museum and literature records from this area. We documented 52 species of amphibians, 24 species of non-avian reptiles, and 39 species of non-volant mammals. Out of these 115 species, 47 are new records for this area and six other species had their geographic ranges expanded with the present study. Furthermore, we present the record of predation of the tree frog Hypsiboas faber by the snake Chironius bicarinatus. Out of the species listed, five species are listed as threatened with extinction in the State of Espírito Santo, and many others have uncertain conservation status. Reserva Biológica de Duas Bocas is an important wildlife refuge, especially considering the expansion of urban areas in its surroundings.