Objetivo: Avaliar a redução microbiana após antissepsia cirúrgica das mãos dos cirurgiões, realizada com preparação alcoólica, em diferentestempos. Método: Estudo de prevalência, pragmático, de campo, realizado em hospital terciário do Brasil. Coletaram-se amostras microbiológicas dasmãos de 54 cirurgiões após lavagem simples, para determinar a flora microbiana basal e, após a antissepsia cirúrgica alcoólica, para avaliar a reduçãomicrobiana imediata. Categorizaram-se os resultados da redução microbiana em redução leve (até 50% de redução da flora bacteriana), moderada (de51 a 80%) e alta (acima de 80%). A pesquisa foi submetida e aprovada pelo Comitê de Ética e Pesquisa da instituição hospitalar privada, sede do estudo, eda instituição de ensino superior federal. Resultados: Nas técnicas realizadas em menos de 90 segundos, houve 80% de redução severa, 6,7% de reduçãomoderada e 13,3% de redução leve. Nas técnicas desempenhadas em mais de 180 segundos, todas as amostras apresentaram redução de contagem bacteriana,o que não ocorreu em tempos menores de antissepsia. Conclusão: Quando a técnica e o tempo recomendados são seguidos, maior é a reduçãobacteriana, em comparação aos tempos menores.