Devido ao uso de antibióticos para o tratamento e prevenção de infecções bacterianas durante a produção de matrizes pesadas, torna-se importante estudar o perfil de resistência e a prevalência de bactérias gram-negativas produtoras de ESBL. Dentre as várias classes de antimicrobianos disponíveis, destacam-se os agentes beta-lactâmicos, categoria antimicrobiana amplamente utilizada em clínica médica humana e veterinária. Assim, este trabalho teve como objetivo avaliar o perfil de resistência e caracterizar as cepas produtoras de beta-lactamases de espectro estendido (ESBL) isoladas de matrizes de corte por meio da coleta de 87 swabs cloacais. As bactérias Gram-negativas foram isoladas em meios seletivos, identificadas por métodos bioquímicos convencionais e MALDI-TOF® e estudadas quanto à resistência antimicrobiana, incluindo ESBL. Das 87 amostras, foram isoladas 52 bactérias gram-negativas. Houve alta resistência bacteriana às principais classes de antimicrobianos utilizados em aves: penicilinas, cefalosporinas e quinolonas. Também foi encontrado fenótipo sugestivo de produção de ESBL em 42,31% dos isolados, demonstrando resistência aos antimicrobianos beta-lactâmicos testados. Os resultados demonstram a necessidade de orientação dos profissionais que trabalham com matrizes de corte, a fim de se reduzir a presença de bactérias resistentes e produtoras de ESBL e evitar sua disseminação para o meio ambiente, ovos férteis e frangos de corte e, consequentemente, carne de frango e humanos.