Abstract ∙ Urbanization is expanding continuously over rural and natural areas and it is imperative to analyze its effect on bird communities. Although the impact of urbanization on bird communities in the Neotropical region has been explored by several authors, there is a scarcity of comparative studies with standardized methodologies that allow establishing whether the effects of urbanization are similar in different ecoregions. We analyzed the urbanization impact on bird communities in three Neotropical cities. Cities were located in different biomes: La Paz (Bolivia) surrounded by a highland plateau and inter‐Andean valleys; Mar del Plata (Argentina) surrounded by agroecosystems of the pampas; and Osorno (Chile), surrounded by agroecosystems, timber plantations, and remnants of temperate forests. In general, high levels of urbanization correlated negatively with bird richness in the three cities, but the response of bird richness to urbanization varied among cities, being linearly negative in La Paz and Osorno and declining only towards high levels of urbanization in Mar del Plata. The effect of urbanization was stronger in La Paz, where more bird species were absent toward higher urbanization levels. Bird abundance did not show significant responses to urbanization. Exotic bird abundance showed a positive relationship with urbanization in the three cities. Bird composition differed between cities and urbanization levels. The House Sparrow (Passer domesticus) was the most abundant species in more urbanized sites, the Eared Dove (Zenaida auriculata) in moderate levels of urbanization, whereas the Rufous‐collared Sparrow (Zonotrichia capensis) was most abundant in the less urbanized sites. The results of our study showed that the impact of urbanization on bird communities in the Neotropical region varied among cities, probably as a result of latitude and the structure of rural areas.Resumen ∙ Comunidades de aves en gradientes de urbanización: un análisis comparativo entre tres ciudades Neotropicales La urbanización se está expandiendo continuamente en áreas rurales y naturales, y siendo imprescindible analizar su efecto sobre las comunidades de aves. Aunque el impacto de la urbanización en el Neotrópico ha sido estudiado por varios autores, existe una escasez de estudios comparativos entre diferentes ecorregiones mediante el uso de metodologías estandarizadas. Por lo tanto, analizamos el impacto de la urbanización sobre comunidades de aves en tres ciudades Neotropicales. Las ciudades estuvieron localizadas en diferentes biomas: La Paz (Bolivia) rodeada por un altiplano y valles interandinos; Mar del Plata (Argentina) rodeada por agroecosistemas de las Pampas; y Osorno (Chile), rodeada por agroecosistemas, plantaciones de árboles y remanentes de bosques nativos. En general, altos niveles de urbanización se correlacionaron negativamente con la riqueza de aves en las tres ciudades. Sin embargo, la respuesta de la riqueza de aves a la urbanización varió entre ciudades, siendo negativamente lineal en La Paz y Osorno, para disminuir solo a partir de altos niveles de urbanización en Mar del Plata. El impacto sobre la riqueza fue mayor en La Paz, donde más especies de aves se perdieron hacia los niveles más altos de urbanización. Por otro lado, la abundancia de aves no se correlacionó con la urbanización. La abundancia de especies exóticas mostró una relación positiva con la urbanización en las tres ciudades. La composición de aves cambió entre niveles de urbanización; el Gorrión común (Passer domesticus) fue la especie más abundante en los niveles más altos de urbanización, la Torcaza (Zenaida auriculata) en sitios de urbanización moderada, mientras que el Chingolo (Zonotrichia capensis) fue la especie más abundante en los niveles más bajos de urbanización. Los resultados de nuestro estudio mostraron que el impacto de la urbanización sobre las comunidades de aves en la región Neotropical varió entre ciudades, probablemente como resultado de la latitud y la estructura de las áreas rurales.